MAG-XTRACT
Catálogo: 13-BR500-25
Apresentação: 250 extrações
Transporte: 10-30°C
Armazenamento: 2-8°C
Instrução de Uso
O Kit MAG-XTRACT é recomendado para o isolamento de RNA/DNA a partir de amostras de soro, sangue, plasma, fluidos corporais, vírus, bactérias, suspensões de células de fezes e tecidos biológicos previamente tratados e homogeneizados e de amostras colhidas em cotonetes acondicionados em solução conservante.
A solução de lise que compõe o kit MAG-XTRACT primeiramente libera o ácido nucléico e, em seguida, o RNA/DNA que estará em suspensão na solução serão capturados pelas beads magnéticas. As beads contendo o RNA/DNA são capturadas por um imã. Em uma próxima etapa, os contaminantes são removidos pelo processo de lavagem. Finalmente, o ácido nucleico é dissociado das beads magnéticas e eluídos em tampão.
Componentes do kit:
Lysis Buffer ……………….. 40 mL
Magnetic Beads………… 13 mL
Binding Buffer…………….. 80 mL
Washing Buffer…………… 250mL
Elution Buffer……………… 20 mL
NOTAS:
O kit MAG-XTRACT pode ser utilizado manualmente ou através de equipamentos de extração de ácidos nucléicos automatizados:
*Para uso manual é necessária a aquisição de uma rack magnética para microtubos de 2,0mL.
**Para uso em sistemas automatizados o conteúdo do kit pode ser distribuído nas placas deep well específicas de cada equipamento.
PROCEDIMENTO:
Em um microtubo de 2,0 mL adicionar 150 uL de Lysis buffer e 250 uL de Isopropanol para cada 250 uL de amostra.
Observação:
para aumentar a eficiência da extração pode ser adicionado 10 uL de Proteinase K na concentração de 20mg/mL, com uma etapa adicional de incubação de 65°C por 10 minutos e prosseguir com o protocolo.
Alternativamente pode ser adicionado 10 uL de Beta-mercaptoetanol puro e prosseguir com o protocolo.
Adicionar 100 uL de Magnetic Beads.
Homogeneizar com auxílio de agitador tipo vortex por 10 segundos.
Colocar o microtubo na rack magnética e deixar por alguns minutos até que as beads se prendem na parede do tubo pelo ímã da rack.
Com auxílio de uma micropipeta, aspirar completamente o líquido evitando contato com as beads.
Retirar o microtubo da rack magnética e adicionar 300 uL de Binding Buffer
Homogeneizar com auxílio de agitador tipo vortex por 10 segundos.
Colocar o microtubo na rack magnética e deixar por alguns minutos até que as beads se prendem na parede do tubo pelo ímã da rack.
Com auxílio de uma micropipeta, aspirar completamente o líquido evitando contato com as beads.
Retirar o microtubo da rack magnética e adicionar 400 uL de Washing Buffer.
Colocar o microtubo na rack magnética e deixar por alguns minutos até que as beads se prendem na parede do tubo pelo ímã da rack.
Com auxílio de uma micropipeta, aspirar completamente o líquido evitando contato com as beads.
Repetir este processo de lavagem com o Washing Buffer, do passo 10 a 12, por mais uma vez.
Com o microtubo na rack magnética, aguardar por 5 minutos a evaporação total dos líquidos residuais.
Observação: não deixar mais do que o tempo recomendado, pois as beads poderão ficar aderidas entre si, favorecendo uma perda de rendimento para a etapa posterior.
Retirar o tubo da rack magnética sem resíduos de líquido, adicionar 100 uL do Elution buffer.
Pipetar up-and-down por 5 segundos.
Recolocar o tubo na rack magnética e deixar a solução no mínimo por 1 minuto.
Retirar o líquido com o RNA/DNA extraído e transferir o líquido para um novo microtubo.
O RNA/DNA extraído deverá ser armazenado de 2 a 8oC por até 12 horas.
Após este período é recomendado armazenar a -20oC ou por longos períodos a -80oC.
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