Genotipagem Precisa e Confiável com PROBE qPCR Master Mix (Cód.: 13-10506-01)

Utilização do PROBE qPCR Master Mix (Código: 13-10506-01) em Genotipagem

Introdução

Genotipagem é um processo crucial em biologia molecular e genética que envolve a identificação de variações genéticas entre indivíduos. A técnica de PCR quantitativo (qPCR) utilizando sondas fluorogênicas, como TaqMan, é uma abordagem poderosa e amplamente utilizada para genotipagem devido à sua alta sensibilidade, especificidade e capacidade de quantificação em tempo real. O PROBE qPCR Master Mix (Código: 13-10506-01) é um kit desenvolvido especificamente para ensaios de qPCR, otimizado para estas aplicações.

Composição do Kit

O PROBE qPCR Master Mix (Código: 13-10506-01) contém:

• 2X PROBE qPCR Master Mix: Inclui tampão de PCR, dNTPs, MgCl2 e estabilizadores.
• Hot Start Taq DNA Polymerase: Uma enzima Taq polimerase recombinante complexada com um anticorpo monoclonal que bloqueia sua atividade à temperatura ambiente, proporcionando um início a quente automático, aumentando a sensibilidade e especificidade das reações de qPCR.

Aplicações em Genotipagem

1. Detecção de Polimorfismos de Nucleotídeo Único (SNPs)

• Descrição: SNPs são variações de nucleotídeo único no genoma e são marcadores genéticos importantes.
• Utilização: O PROBE qPCR Master Mix é utilizado para identificar SNPs específicos em amostras de DNA. Sondas TaqMan são desenhadas para se ligar a sequências específicas contendo o SNP de interesse. A presença ou ausência do SNP é detectada pela emissão de fluorescência durante a reação de qPCR, permitindo a genotipagem precisa.

2. Análise de Variações do Número de Cópias (CNVs)

• Descrição: CNVs são variações na quantidade de cópias de uma determinada região do genoma.
• Utilização: O kit é utilizado para quantificar CNVs através da amplificação de regiões específicas do genoma. A quantidade relativa de produto amplificado é comparada com controles conhecidos para determinar a presença de CNVs.

3. Detecção de Inserções e Deleções (Indels)

• Descrição: Indels são pequenas inserções ou deleções de bases no genoma.
• Utilização: O kit permite a detecção de indels utilizando sondas específicas para as regiões alvo. A diferença no comprimento dos fragmentos amplificados resulta em variações na fluorescência, permitindo a identificação precisa de indels.

Vantagens do PROBE qPCR Master Mix em Genotipagem

1. Alta Sensibilidade e Especificidade: A Hot Start Taq DNA Polymerase e as sondas TaqMan proporcionam alta precisão na detecção de variações genéticas, minimizando a amplificação não específica.
2. Compatibilidade com Vários Instrumentos de qPCR: O kit é compatível com uma ampla gama de equipamentos de qPCR, facilitando a integração em diversos laboratórios.
3. Facilidade de Uso: O formato pronto para uso do master mix reduz o tempo de preparação e os possíveis erros de pipetagem, garantindo resultados consistentes.
4. Robustez: O kit foi otimizado para diversas aplicações de qPCR, suportando uma ampla gama de condições de reação e tipos de amostras, desde DNA genômico até cDNA.

Protocolo de Genotipagem

1. Preparação da Reação:
   • Descongele todos os componentes à temperatura ambiente.
   • Prepare a mistura de reação de acordo com o protocolo fornecido:
     • 2X PROBE qPCR Master Mix: 12,5 µL
     • Primer Forward (20 µM): 0,5 µL
     • Primer Reverse (20 µM): 0,5 µL
     • Probe (10 µM): 0,5 µL
     • Hot Start Taq DNA Polymerase: 0,5 µL
     • DNA Template: <10,5 µL
     • Água livre de nucleases: para completar 25 µL
2. Condições de Amplificação:
   • Desnaturação inicial: 95°C por 2 minutos
   • Ciclos (40x):
     • Desnaturação: 95°C por 15 segundos
     • Anelamento e Extensão: 60°C por 60 segundos (aquisição de dados)
3. Análise de Dados:
   • Utilize software de análise de qPCR para interpretar os dados de fluorescência.
   • Compare os valores de ciclo limiar (CT) para determinar a presença ou ausência das variantes genéticas.

Conclusão

O PROBE qPCR Master Mix (Código: 13-10506-01) é uma ferramenta essencial para genotipagem, oferecendo precisão e confiabilidade na detecção de variações genéticas. Sua formulação otimizada e facilidade de uso fazem dele uma escolha excelente para laboratórios que realizam estudos genéticos detalhados e de alta qualidade.