Kit para extração e purificação de RNA, com coluna de silica, RUO 13-BR850

Reagentes para Extração e Purificação de RNA

Código: 13-BR850-50 – Apresentação: 50 extrações

Código: 13-BR850-25 – Apresentação: 250 extrações

Instruções de Uso

1. Uso Pretendido

Os reagentes para extração e purificação de RNA utilizam colunas de sílica (cartuchos/filtro). Seu uso é recomendado para sangue total, plasma, soro, urina, cultura de células e amostras coletadas em swab nasofaríngeo.

2. Características do Produto

Os reagentes compõem um sistema que utiliza a tecnologia de colunas de sílica com elevada capacidade de ligação para isolamento e purificação de RNA de várias amostras, incluindo plasma, soro, sangue total, urina, cultivo celular e amostras de swab nasofaríngeo para procedimentos de diagnóstico in vitro. A adição do Carreador ao tampão de lise otimiza a extração de RNA, e a Proteinase K facilita a lise de proteínas presentes nas amostras.

2.1 Composição do Produto

Componentes (50 extrações):

• Hemalise-RBC 10X: 9,0 mL (01 unidade)
• Carreador de RNA liofilizado: 01 unidade
• Proteinase K (PK) liofilizada: 01 unidade
• Diluente PA/PK: 1,0 mL (01 unidade)
• Tampão de Lise: 20,0 mL (01 unidade)
• Tampão de Lavagem A concentrado: 16,5 mL (01 unidade)
• Tampão de Lavagem B concentrado: 9,0 mL (01 unidade)
• Tampão de Eluição: 2,5 mL (01 unidade)
• Coluna de Sílica: 50 unidades
• Tubo coletor: 50 unidades

2.2 Especificações

Os reagentes oferecem uma extração em coluna de sílica com excelente rendimento. Uso recomendado com matrizes biológicas respiratórias, sangue e meios de transporte. O RNA extraído poderá ser utilizado em técnicas de biologia molecular, incluindo qPCR e RT-qPCR.

2.3 Equipamentos, Reagentes e Insumos Necessários (não fornecidos)

• Centrífuga – 20.000 x g (14.000 rpm)
• Micropipetas e ponteiras de 1-10 µL e 100-1000 µL
• Agitador tipo Vórtex
• Bloco de aquecimento, Banho Maria, Banho seco ou estufa para incubação a 56°C
• Etanol absoluto (95-100%)
• Microtubos de 1,5 mL e 2 mL
• Tubos graduados tipo Falcon (15 mL e 50 mL)
• Luvas descartáveis

2.4 Preparo dos Reagentes

• Proteinase K: Adicionar 500 µL de Diluente PA/PK para reconstituir. Armazenar em –20°C após reconstituição.
• Carreador de RNA: Adicionar 250 µL de Diluente PA/PK para reconstituir. Recomenda-se preparar alíquotas para evitar ciclos de congelamento e descongelamento.
• Hemalise 1X: Diluir 1:10 a solução de Hemalise-RBC 10X em água ultrapura.
• Tampão de Lavagem A: Adicionar 13,5 mL de etanol absoluto ao concentrado de 16,5 mL para um volume final de 30 mL.
• Tampão de Lavagem B: Adicionar 21,0 mL de etanol absoluto ao concentrado de 9,0 mL para um volume final de 30 mL.

3. Armazenamento e Transporte

Os componentes podem ser transportados em temperatura ambiente (10 a 30°C) e são estáveis até a data de validade descrita na embalagem. Se ocorrer precipitação no Tampão de Lise ou no Tampão de Lavagem A devido a baixas temperaturas, aquecer entre 55°C e 65°C até a dissolução completa.

4. Validade

Os reagentes têm validade de 12 meses quando mantidos fechados e armazenados corretamente.

5. Informação de Segurança

5.1 Os reagentes devem ser utilizados somente por pessoal técnico qualificado. 5.2 Utilizar equipamentos de proteção individual e seguir procedimentos de biossegurança. 5.3 Controlar o ambiente do laboratório para evitar contaminantes. 5.4 Verificar se as embalagens estão danificadas ao receber os reagentes. 5.5 Não utilizar componentes danificados. 5.6 Não trocar componentes de diferentes lotes. 5.7 Não utilizar após a data de validade. 5.8 Armazenar os químicos e plásticos em condições apropriadas. 5.9 Trabalhar em cabine de fluxo laminar para minimizar o risco de contaminações. 5.10 Utilizar ponteiras descartáveis com filtro para evitar contaminação cruzada.

6. Procedimento

Sangue total, soro, plasma, urina, cultura de células e amostras de swab nasofaríngeo podem ser processados com os reagentes de extração de RNA em coluna.

6.1 Preparação das Amostras

Desenvolvido para purificação a partir de 200 µL de sangue total, soro, plasma ou cultura de células e 300 µL para amostras nasofaríngeas. Para urina, centrifugar 2 mL para uso do pellet.

7. Protocolo Geral

7.1 Adicionar 400 µL do Tampão de Lise a um microtubo de 2 mL com a amostra.

7.2 Adicionar 10 µL de Proteinase K.

7.3 Vortexar por 15 segundos.

7.4 Centrifugar rapidamente.

7.5 Incubar a 56°C por 10 minutos.

7.6 Deixar em temperatura ambiente por 2 minutos.

7.7 Adicionar 5 µL do carreador de RNA e vortexar por 15 segundos.

7.8 Centrifugar rapidamente.

7.9 Incubar em temperatura ambiente por 10 minutos.

7.10 Adicionar 450 µL de etanol absoluto e homogeneizar imediatamente.

7.11 Vortexar por 15 segundos.

7.12 Centrifugar rapidamente.

7.13 Transferir 600 µL da amostra preparada para coluna de sílica acoplada ao tubo coletor.

7.14 Centrifugar a 6.000 x g por 1 minuto.

7.15 Descartar o líquido do tubo coletor.

7.16 Repetir os passos 7.13 a 7.15 para o restante da amostra.

7.17 Adicionar 500 µL do Tampão de Lavagem A e centrifugar a 6.000 x g por 1 minuto.

7.18 Descartar o líquido do tubo coletor.

7.19 Adicionar 500 µL do Tampão de Lavagem B e centrifugar a 6.000 x g por 1 minuto.

7.20 Descartar o líquido do tubo coletor.

7.21 Centrifugar a 20.000 x g por 3 minutos.

7.22 Transferir a coluna de sílica para um microtubo de 1,5 mL.

7.23 Adicionar 50 µL do Tampão de Eluição diretamente à membrana de sílica.

7.24 Incubar a temperatura ambiente por 2 minutos.

7.25 Centrifugar a 6.000 x g por 1 minuto. 7.26 Armazenar o RNA eluído a -20°C ou utilizá-lo imediatamente.

8. Controle da Qualidade

Problemas e Soluções Comuns:

• Baixo rendimento do RNA: Pode ser causado por amostras inadequadas ou procedimentos incorretos. Evitar congelamento/descongelamento repetitivo e assegurar a correta preparação do Carreador de RNA.
• Baixa qualidade do RNA: Verificar a integridade dos reagentes e a completa dissolução dos tampões. Garantir a eficiência da etapa de lise e a adição correta de etanol.
• Baixo desempenho em aplicações laboratoriais: Garantir que a coluna esteja seca antes da eluição e evitar contaminações. Certificar-se de que a quantidade de Carreador de RNA adicionada seja adequada.

9. Garantia da Qualidade

A garantia do fabricante cobre defeitos de produção durante o período de validade do produto, exceto em casos de mau uso, conservação inadequada ou utilização fora de sua finalidade.

100 possíveis utilidades, agrupadas em categorias para facilitar a compreensão:

Diagnóstico de Doenças

1. Diagnóstico de COVID-19
2. Diagnóstico de Influenza
3. Diagnóstico de Hepatite B
4. Diagnóstico de Hepatite C
5. Diagnóstico de HIV
6. Diagnóstico de Zika
7. Diagnóstico de Dengue
8. Diagnóstico de Chikungunya
9. Diagnóstico de HPV
10. Diagnóstico de Tuberculose

Pesquisa em Doenças Infecciosas

11. Pesquisa sobre patogênese viral
12. Pesquisa sobre resistência antimicrobiana
13. Estudos de epidemiologia molecular
14. Monitoramento de surtos infecciosos
15. Desenvolvimento de vacinas

Estudos Genéticos e Genômicos

16. Sequenciamento de RNA (RNA-seq)
17. Estudos de expressão gênica
18. Análise de transcritos específicos
19. Estudos de variantes de RNA
20. Detecção de mutações genéticas

Biologia Molecular

21. Clonagem de genes
22. Estudo de splicing alternativo
23. Análise de RNA mensageiro (mRNA)
24. Análise de microRNA (miRNA)
25. Estudos de RNA não codificante (ncRNA)

Pesquisa em Câncer

26. Perfil de expressão gênica em tumores
27. Estudo de biomarcadores de câncer
28. Análise de RNA tumoral circulante
29. Pesquisa sobre mecanismos de metástase
30. Desenvolvimento de terapias baseadas em RNA

Desenvolvimento de Terapias

31. Terapias de RNAi (RNA de interferência)
32. Terapias de mRNA
33. Estudos de edição genética CRISPR/Cas9
34. Desenvolvimento de oligonucleotídeos antisense
35. Estudos de terapia gênica

Estudos de Imunologia

36. Análise de resposta imunológica
37. Estudo de citocinas e quimiocinas
38. Pesquisa sobre células T e B
39. Estudos de vacinas de RNA
40. Desenvolvimento de imunoterapias

Estudos de Doenças Neurológicas

41. Pesquisa sobre Alzheimer
42. Pesquisa sobre Parkinson
43. Estudos de esclerose múltipla
44. Pesquisa sobre doenças neurodegenerativas
45. Análise de RNA em amostras de tecido cerebral

Estudos de Doenças Cardiovasculares

46. Análise de expressão gênica em doenças cardíacas
47. Pesquisa sobre insuficiência cardíaca
48. Estudos de hipertensão
49. Análise de biomarcadores cardíacos
50. Desenvolvimento de terapias cardiovasculares

Biotecnologia e Indústria Farmacêutica

51. Desenvolvimento de novos medicamentos
52. Testes de eficácia de fármacos
53. Pesquisa em bioprocessos
54. Estudos de farmacogenômica
55. Validação de alvos terapêuticos

Agricultura e Veterinária

56. Diagnóstico de doenças em plantas
57. Pesquisa sobre patógenos de plantas
58. Estudos de expressão gênica em plantas
59. Diagnóstico de doenças animais
60. Pesquisa sobre genética animal

Microbiologia Ambiental

61. Estudos de microbioma
62. Análise de metagenômica
63. Pesquisa sobre biodegradação
64. Monitoramento de poluição ambiental
65. Análise de comunidades microbianas em solos e águas

Pesquisa em Desenvolvimento e Diferenciação Celular

66. Estudos de células-tronco
67. Pesquisa sobre desenvolvimento embrionário
68. Análise de diferenciação celular
69. Pesquisa sobre organoides
70. Estudos de regeneração de tecidos

Estudos de Metabolismo

71. Pesquisa sobre metabolismo energético
72. Análise de expressão de genes metabólicos
73. Estudos de metabolismo de carboidratos
74. Pesquisa sobre metabolismo de lipídios
75. Estudos de metabolismo proteico

Virologia

76. Pesquisa sobre ciclo de vida viral
77. Estudos de interação vírus-hospedeiro
78. Análise de resistência viral a antivirais
79. Desenvolvimento de novos antivirais
80. Estudos de evolução viral

Proteômica e Interatômica

81. Estudos de RNA-proteína
82. Análise de ribossomos
83. Pesquisa sobre modificações pós-transcricionais
84. Estudos de estrutura de RNA
85. Desenvolvimento de métodos de purificação de RNA

Pesquisa em Doenças Raras

86. Diagnóstico de doenças genéticas raras
87. Estudos de expressão gênica em doenças raras
88. Pesquisa sobre novas terapias para doenças raras
89. Desenvolvimento de testes diagnósticos
90. Análise de RNA em modelos de doenças raras

Biologia Sintética

91. Construção de circuitos genéticos
92. Estudos de RNA sintético
93. Pesquisa sobre redes de regulação gênica
94. Desenvolvimento de novos organismos sintéticos
95. Análise de expressão de genes sintéticos

Outros

96. Pesquisa sobre envelhecimento
97. Estudos de interação hospedeiro-patógeno
98. Desenvolvimento de biossensores de RNA
99. Análise de expressão gênica em resposta a estresses ambientais
100. Estudos de epigenética e regulação gênica

Essas utilidades ilustram a ampla gama de aplicações que o kit de extração e purificação de RNA pode ter, demonstrando sua importância e versatilidade na pesquisa científica e na prática clínica.