TRI Reagent®
Sinônimo: Reagente de isolamento de RNA
É o mesmo que TRIZOL
Quantidade 100mL
O TRI Reagent® é um reagente amplamente utilizado na extração de ácido ribonucleico (RNA), ácido desoxirribonucleico (DNA) e proteínas a partir de amostras biológicas. Ele é um reagente monofásico que combina fenol e guanidina tiocianato, permitindo a extração eficiente de ácidos nucleicos e proteínas em uma única etapa.
A utilização do TRI Reagent® é relativamente simples e envolve os seguintes passos:
- Preparação da amostra: A amostra biológica, que pode ser tecido, células ou outros materiais biológicos, deve ser coletada e homogeneizada adequadamente para garantir a representatividade do material a ser extraído.
- Adição do TRI Reagent®: O TRI Reagent® é adicionado diretamente à amostra em uma proporção adequada, geralmente na proporção de 1 ml de TRI Reagent® para 1 g de tecido ou 1 x 10^6 células. É importante garantir que a amostra esteja completamente suspensa no reagente.
- Homogeneização: A amostra e o TRI Reagent® são misturados completamente, geralmente por agitação vigorosa ou trituração mecânica, para romper as células e garantir a completa liberação do material genético e proteico.
- Fase de separação: Após a homogeneização, o TRI Reagent® é capaz de separar os componentes da amostra em diferentes fases. A fase orgânica contém o fenol e o clorofórmio, enquanto a fase aquosa contém o RNA ou DNA solubilizado, proteínas e outros componentes celulares.
- Separação das fases: A mistura é centrifugada em alta velocidade para promover a separação das fases. Durante a centrifugação, as moléculas de RNA ou DNA ficam retidas na fase aquosa, enquanto as proteínas e outros contaminantes ficam retidos na fase orgânica.
- Recuperação do RNA ou DNA: A fase aquosa contendo o RNA ou DNA é transferida cuidadosamente para um novo tubo de reação, evitando a contaminação com a fase orgânica. Em seguida, é adicionado um álcool, geralmente isopropanol ou etanol, para precipitar o ácido nucleico. O tubo é invertido suavemente para permitir a formação do precipitado.
- Lavagem e purificação: O precipitado de RNA ou DNA é centrifugado novamente para separar os resíduos de reagentes e outros contaminantes. O pellet resultante é lavado com etanol ou outro agente de lavagem para remover impurezas.
- Ressuspensão do RNA ou DNA: O pellet final contendo o RNA ou DNA é ressuspendido em um tampão adequado, geralmente RNase-free água ou um tampão de eluição, para obter uma solução concentrada e purificada do ácido nucleico.
O TRI Reagent® é amplamente utilizado em pesquisas científicas e laboratórios para a extração de RNA e DNA de alta qualidade, sendo uma ferramenta essencial em estudos de biologia molecular, genética e diagnóstico molecular. É importante seguir as instruções fornecidas pelo fabricante e tomar as precauções de segurança adequadas ao lidar com o reagente, como trabalhar em uma capela de fluxo laminar e usar equipamentos de proteção individual, devido à toxicidade do fenol e do clorofórmio.
