Tripsina 1:250 – 0,25% – 1X
N°. Cat.: BR30042-01
Apresentação: 100 mL
Armazenamento: -20ºC
CARACTERÍSTICAS:
Esta é uma solução equilibrada de tripsina de origem suína, livre de íons de cálcio e magnésio. O EDTA presente atua como agente quelante. Essa solução permite o descolamento de células de frascos de cultura, bem como a desagregação de células entre si devido às suas propriedades proteolíticas sobre as proteínas intercelulares, além de alterar a estabilidade das membranas ao quelar o íon cálcio.
APLICAÇÃO:
Esta solução é indicada na separação de células de órgãos e tecidos, seja de culturas em monocamadas ou camadas múltiplas. Como o processo de descolamento e separação de células geralmente é feito sob microscópio, é possível controlá-lo interrompendo sua ação com a adição de meio contendo soro animal ou humano.
COMPONENTES E CARACTERÍSTICAS FÍSICO-QUÍMICAS:
- Tripsina
- EDTA
- HBSS modificado
- Bicarbonato de sódio
Aspecto: Límpido e transparente
pH: 7,0 ± 0,2
CONSERVAÇÃO:
Descongele apenas no momento de uso, pois como é uma enzima proteolítica, pode sofrer autodigestão e perder atividade. Alterações para valores próximos de 7,9 e uso a 37ºC aumentam sua atividade, mas o oposto ocorre com diminuição de pH e temperatura.
PARA REMOVER CÉLULAS DE CULTURAS ADERIDAS AO FRASCO:
- Remova todo o meio do frasco por inversão ou aspiração.
- Adicione aproximadamente 0,1 ml/cm² da solução de Tripsina/EDTA para lavar a superfície das células.
- Adicione cerca de 0,05 mL/cm² da solução sob a superfície celular e observe ao microscópio.
- Quando as células adquirirem um aspecto redondo e individualizado, adicione 0,2 ml/cm² de meio com soro à 10% para interromper o processo.
- Homogeneize as células para proceder com diluição, congelamento, etc.
PARA REMOVER CÉLULAS DE ÓRGÃOS OU TECIDOS:
- Lave bem o órgão ou tecido em meio sem soro.
- Pique o órgão em pedaços pequenos (+1mm) com uma tesoura de íris.
- Aspire todo o sobrenadante.
- Adicione Tripsina/EDTA em volume de 3 a 10 vezes o correspondente do tecido picotado.
- Agite lentamente em um Erlenmeyer.
- Após o tempo de ação da solução de Tripsina, aspire o sobrenadante e verta-o para tubos com meio completo com soro à 10%.
- Centrifugue, despreze o sobrenadante, adicione novo meio completo, homogeneize e distribua as células em frascos de cultivo.
